我可以使用哪些实验室诊断方法来诊断PRRS？我应该根据情况选择哪一个？如何解释结果？

　　可用分析

　　暴露于PRRS后的病毒和抗体检测示意图：下图显示了测定中使用的不同分析物的浓度（Y轴）随时间（X轴）的变化。暴露于PRRS病毒后，会在猪的血液中发现病毒（病毒血症），这种病毒通常持续2至4周，具体时间取决于猪的年龄和免疫状况。血清转化（抗体检测）通常发生在暴露后7至10天之间，持续数月后才变为血清阴性。中和抗体在暴露后4至6周出现（López和Osorio，2004）。

　　聚合酶链反应（PCR）

　　检测病毒核酸（RNA）特定序列的存在。

　　样本类型：组织，全血，血清，口腔液体等。

　　优点：

　　通常可以同时检测5个血清或组织样本以降低成本，同时最大程度地降低灵敏度损失。

　　由于预期的较高Ct值（较低的病毒浓度），通常不合并口腔液体，这可能会导致敏感性显着下降。

　　使用单独的引物同时检测同一样品中的PRRS 1型（欧洲）和2型（北美）。

　　灵敏度高（可以检测到少量病毒）。

　　早期发现-急性病例应为阳性。

　　可以使用许多不同的样本类型（组织，血液，血清，口腔液体等）。

　　成本适中：

　　缺点:

　　PRRS 1型和2型引物都必须更新。

　　实验室必须定期更新引物以避免假阴性。

　　测序需要区分疫苗病毒和野生型感染。

　　酶联免疫吸附测定（ELISA）

　　检测抗体的存在。

　　样品类型：血清或口腔液体（某些试剂盒）。

　　优点：

　　大多数可检测PRRS 1型和2型抗体。

　　动物保持阳性数月（3-12个月）。

　　可用于慢性病例。

　　缺点:

　　各种可用的商品试剂盒之间，检测到的特异性抗体和检测时间可能略有不同。

　　动物血清阳性需要7到10天。

　　无法区分母源抗体与暴露。

　　无法区分疫苗与野生型感染。

　　免疫组织化学（IHC）

　　检测病毒抗原的存在。

　　样本类型：组织。

　　优点 :

　　病变部位检测病毒（良好的病因证明）。

　　可以识别病毒的低、中、高含量。

　　缺点 :

　　必须提交正确的组织样本。

　　与PCR相比，需要更多的病毒存在。

　　仅可评估少量的组织样本。

　　基因测序

　　测序病毒的核酸基因（RNA）。

　　测序病毒的核酸基因（RNA）。

　　优点:

　　可以区分野生型病毒和疫苗。

　　可以帮助区分新病毒的引入与现有或过去的病毒。

　　缺点:

　　昂贵。

　　通常仅对ORF5进行测序，其仅为约15,000个碱基对中的600个。

　　CT值大于34的样本往往难以测序。

　　表1：爱荷华州立大学兽医诊断实验室基于口腔液体样品中PRRS PCR循环阈值（Ct）值的序列成功率。Chris Rademacher等人，2016

　　间接荧光抗体（IFA）

　　检测抗体的存在。

　　样品类型：血清。

　　优点:

　　与PCR测试一起，可以用作意外ELISA阳性样品的确认测试。

　　图示说明使用PRRS IFA对PRRS ELISA意外阳性的样品进行确认试验。疑似阴性样品的ELISA检测为阴性，则视为阴性。如果该样本意外呈阳性，则可进行PRRS IFA确认试验。也就是说，如果IFA测试是阳性的，则确认样品是阳性的。如果IFA试验是阴性的，只要PCR也是阴性的，我们就假设它是假阳性，以便确认最近没有感染。

　　缺点:

　　对于大量样品不可行。

　　用于分析的病毒分离物对结果的影响。

　　可靠性高度依赖于技术人员的技能。

　　结果解释

　　PCR

　　阳性-病毒存在/传播高度提示病因，尤其是Ct值较低且存在临床症状。最近用改良活病毒接种疫苗可导致PCR阳性。

　　阴性-如果在感染后期进行检测，则可能会呈阴性或未检测到病毒。

　　ELISA

　　阳性-母源抗体或过去接触疫苗或野生型病毒（通常在接触后7-10天以上）。

　　阴性-阴性或感染初期以至于无法检测到（通常必须在暴露后至少7-10天）。

　　IHC

　　阳性–病变部位存在病毒。

　　阴性-如果在感染后期进行检测，则可能会呈阴性或未检测到病毒。

　　基因测序

　　疫苗病毒–预期同源性>99%。

　　野生型病毒-估计每年约有1-2%的同源性损失。

　　IFA

　　阳性-母源抗体或过去接触疫苗或野生型病毒（通常在接触后7-10天以上）。

　　阴性-阴性或感染初期以至于无法检测到（通常必须在暴露后至少7-10天）。

　　场景

　　母猪/后备母猪流产

　　流产的胚胎：收集6-8个胚胎合并进行PCR测试。流产的胚胎中只有大约50％的PCR阳性（因此需要对许多胚胎进行采样），但是阳性胚胎中病毒的浓度很高，因此可以每10个一组进行PCR检测。

　　流产的母猪/后备母猪：收集最近流产（<10天）的母猪/后备母猪的血清以进行PCR测试。可以每5组一起进行测试。ELISA测试没有用，因为母猪/后备母猪通常需要7到9天才能检测出阳性。

　　母猪/后备母猪繁殖问题

　　从受影响的母猪/后备母猪收集15至20个样品，从未受影响的母猪/后备母猪收集15至20个样品，并通过PCR（5个或6个一组）和ELISA（单独）进行测试。

　　分娩时的弱小仔猪

　　可以从有较弱仔猪的窝中收集群体口腔液体，并通过PCR进行测试。

　　可以在产房从不同窝的猪中收集睾丸（如果进行阉割），尾巴，舌头组织（死猪）。可以将大量样本集中在一起进行测试。

　　通过每窝收集2至3头仔猪，收集10窝受影响仔猪的血清样品，并通过PCR进行测试，每组5-6头仔猪。确保仔猪未进行PRRS疫苗接种。

　　具有PRRS急性临床体征的生长猪

　　从4到6个不同猪栏中收集口腔液体，并通过PCR分别进行测试。不要合并样本进行测试。

　　从具有临床体征的猪中或随机取样，采集30份血清样品，并通过PCR进行测试。可以以5个或6个为一组进行PCR测试。还可以通过ELISA测试单个样品以确认暴露。

　　来源：Pig333